從熒光的發光原理開始，簡單介紹免疫熒光（IF）應用

　　熒光分子可以說是生物學研究中最經常使用的標記分子，它們作為探針標記目標分子，可用于監測其表達量及示蹤。它們相對于放射性同位素更加安全和環保，相對于不發光的標記物如HRP或金屬顆粒等更加靈敏。因而應用非常廣泛。下面我們將從熒光的發光原理開始，簡單介紹免疫熒光（IF）應用。

光相關知識點

　　光是一種可見的電磁波，是能量的輻射形式。光的波長越長，光子的能量越小。

　　光進入某物質后，部分或全部的光能可被物質的分子或原子所吸收。光的吸收具有選擇性，一定能量的光量子輻射只能被一定結構的物質吸收。

熒光物質知識點

　　熒光的基礎知識：熒光是物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光。

　　熒光物質的種類：芳香族及雜環化合物、熒光蛋白、納米顆粒（量子點）。

　　熒光物質發光原理：光照射到某些原子時，光的能量使原子核周圍的一些電子由原來的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態躍遷到**激發單線態或第二激發單線態等。**激發單線態或第二激發單線態等是不穩定的，瞬間將恢復基態，當電子由**激發單線態恢復到基態時，能量會以光的形式釋放，產生熒光。

　　每一種熒光物質都有其特定的激發光譜（Excitation）和發射光譜（Emission）。通常以相對強度為縱軸，以波長為橫軸，這些吸收光譜和發射光譜有很好的對應關系。激發光譜是固定發射光的波長，測量激發光的波長（有時候也測波數或者頻率等）與熒光強度之間的關系；發射光譜是固定激發波的波長，測定發射光強度與波長的關系。熒光物質的發射波長總是大于其激發波長。

熒光標記的應用

　　熒光標記幾乎可以用于所有生物學檢測，作為蛋白或抗體標記物可用于ELISA、IF、FCM、WB，蛋白芯片、及活體成像等，作為核酸標記物可用于FISH、基因芯片、qRT-PCR等。熒光標記幾乎可以用于從宏觀的活體研究到微觀的組織、細胞、分子，甚至分子內、分子間作用的所有生物學研究領域。

　　熒光標記最常見的生物學應用是免疫熒光（IF）和流式細胞術（FCM）。在免疫熒光中，最常用的是靶點胞內定位、示蹤及活體分子成像等。