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鳩寧病毒PCR檢測試劑盒反應五要素

發表時間:2021-03-18 14:12

鳩寧病毒PCR檢測試劑盒反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

人異質性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A3,hnRNP A3 ELISA Kit

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人異質性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1 ELISA Kit

人異質性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1 ELISA Kit

人異質性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A0,hnRNP A0 ELISA Kit

人異質性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A0,hnRNP A0 ELISA Kit

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人異質核糖核蛋白Q(SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1)ELISA試劑盒Human SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1 ELISA kit

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