細胞周期蛋白1結合蛋白抗體?的生物素化標記實驗要點

細胞周期蛋白1結合蛋白抗體的生物素化標記實驗要點：

1.如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質在反應前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；

2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質之間的分子比按蛋白質表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件；

3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結合位點可能因此被封閉,導致抗體失活；

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；

5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結合力或活性；

6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結合；

7.交聯反應后,應充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結合產生競爭作用；

8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。

APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體

甲胎蛋白單克隆抗體（包被）

甲胎蛋白單克隆抗體(檢測)

ADP核糖基化因子結合蛋白1抗體

芳香烴受體抗體

吸引素抗體

腺苷三磷酸結合盒轉運體A1抗體

蛋白激酶B2

血管生成素2抗體

芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體

腺苷A2A受體抗體

蛋白激酶A錨定蛋白95抗體

頂膜鈉依賴性膽鹽轉運體蛋白抗體

去整合素樣金屬蛋白酶8抗體

芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白3抗體

ACN9蛋白抗體

雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端）

腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體

腺苷酸激酶抗體

α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1

細胞凋亡相關蛋白3抗體

肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體

ATP結合蛋白家族7抗體

ASCL2蛋白抗體