植物細胞組織培養實驗步驟

   植物的性：植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力，稱為植物的性。

    植物組織培養就是利用植物的性進行離體無菌植物培養的一門技術。植物組織培養按其原始意義，就是指愈傷組織培養。但發展至今，其范圍日益擴大，已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質體的離體無菌培養。因此，擁有幾種不同水平的培養技術，即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質的培養技術。

    儀器設備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養箱或溫室；

    材料煙草無菌苗、豌豆幼苗。

    試劑

    （1）MS培養基，植物激素：NAA、6-BA等；

    （2）飽和漂液（次氯酸鈉）；

    （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

    （4）無菌水

    四．實驗步驟

    豌豆苗的莖尖培養

    ⑴取發芽6天的豌豆幼苗10株，簡取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無菌）用無菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養皿中。

    ⑵在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐。

    ⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養基上誘導愈傷組織形成，用封口膜將培養皿封好。

    （4）在恒溫培養箱中，26℃下,培養六周，形成愈傷組織，經繼代后，可用于生根培養

（5）生根培養階段，將已形成愈傷組織的豌豆莖尖轉移至含有較低濃度植物激素（如減半的NAA和6-BA）的MS培養基中，以促進根系的形成。此階段需繼續維持無菌條件，避免微生物污染影響培養效果。

（6）觀察記錄：在生根培養過程中，定期使用雙筒解剖顯微鏡觀察根系的生長情況，記錄根的數量、長度及形態變化。同時，注意培養皿內的濕度和光照條件，適時調整以優化培養環境。

（7）煉苗與移栽：當根系發育良好，達到一定數量和長度時，開始進行煉苗處理。逐步減少培養箱內的光照強度和時間，使植株逐漸適應外界環境。煉苗結束后，將植株小心地從培養基中取出，洗凈根部殘留的培養基，移栽至經過消毒的土壤中，置于溫室或適宜的生長環境中繼續培養。

（8）后續觀察與管理：移栽后的豌豆植株需密切關注其生長狀況，包括葉片顏色、植株高度、開花結果等，及時澆水、施肥并防治病蟲害，以確保植株健康生長，最終收獲種子或用于進一步的遺傳學研究。

通過本次實驗，不僅掌握了植物細胞和組織培養的基本技術，還深刻理解了無菌操作的重要性及其在植物繁殖、遺傳改良等方面的廣泛應用價值。