氣泡會對ELISA實驗結果產生哪些影響

   氣泡確實可能對ELISA實驗結果產生干擾，尤其是在液體分配和孵育階段。當樣本或試劑中存在氣泡時，它們可能阻礙抗原抗體的有效結合，導致反應不均勻或信號讀取異常。具體影響主要體現在以下幾個方面：

   首先，氣泡可能干擾光學信號的檢測。ELISA依賴酶標儀對微孔板底部的吸光度進行測量，而氣泡會散射光線，導致吸光度值假性升高或波動，尤其在最后顯色步驟中，微小的氣泡可能被誤 判為陽性信號。曾有研究表明，直徑超過1mm的氣泡可使OD值偏差高達15%。

   其次，在孵育過程中，氣泡占據液面空間會減少有效反應面積。若氣泡附著在包被抗體的孔壁，會形成局部"隔離區"，阻礙樣本與固相抗體的接觸。這種情況下，即使充分混勻，氣泡覆蓋區域的反應效率仍會顯著降低，導致標準曲線線性度下降或樣本重復孔間CV值增大。

   為減少氣泡干擾，實驗操作時需注意：1）加樣槍頭應貼壁緩慢釋放液體，避免快速沖擊產生氣泡；2）孵育前可短暫離心微孔板（1000rpm，1分鐘）去除氣泡；3）使用表面活性劑如Tween-20可降低液體表面張力。值得注意的是，自動化ELISA系統通過超聲波除泡模塊能更有效控制該問題，而手工操作時建議在讀數前用無菌針頭挑破肉眼可見的氣泡。

   質量控制方面，建議每次實驗設置"氣泡干擾對照孔"：故意在陰性對照孔中**氣泡，觀察其對基線信號的影響程度。若發現氣泡導致OD值異常，應重新檢測受影響樣本。通過規范操作和系統驗證，可將氣泡干擾控制在允許誤差范圍內。