NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒的詳細(xì)操作步驟

以下是NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒的詳細(xì)操作步驟，綜合了多個(gè)試劑盒說(shuō)明書中的關(guān)鍵信息：

一、樣本前處理

?組織/細(xì)胞樣本處理?

稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10μL試劑三，冰浴勻漿?。

600g、4℃離心5分鐘，棄沉淀；上清液11000g、4℃離心10分鐘，上清為胞漿蛋白（可選測(cè)線粒體泄漏的NOX）?。

沉淀（線粒體）加入200μL試劑二和2μL試劑三，冰浴超聲破碎（功率20%或200W，超聲3秒間隔10秒，重復(fù)30次）?。

?血清/漿樣品?

直接檢測(cè)，無(wú)需前處理?。

二、測(cè)定步驟

?儀器準(zhǔn)備?

分光光度計(jì)預(yù)熱30分鐘，波長(zhǎng)調(diào)至600nm，蒸餾水調(diào)零?。

?反應(yīng)體系配制?

37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）預(yù)孵育試劑四、五、六5分鐘?。

在1mL石英比色皿中加入：40μL樣本、700μL試劑四、100μL試劑五、160μL試劑六，混勻?。

?檢測(cè)與計(jì)算?

記錄600nm處20秒（A1）和1分20秒（A2）的吸光值，計(jì)算ΔA=A1-A2?。

三、注意事項(xiàng)

?試劑保存?：試劑六需臨用前配制，分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融?。

?樣本量調(diào)整?：若樣本量增加，需按比例調(diào)整提取液體積（如組織質(zhì)量:提取液=1:5~10）?。