包裝與品牌：

產品介紹：             

● 裂解液MS中含變性劑，請不要直接接觸皮膚。

● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋，即含75%乙醇。

產品說明

本產品可用于海洋動物全血/體液樣本的基因組DNA的純化。純化原理是首先利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA，由硅膠膜柱可逆吸附體系內的基因組DNA，經蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質、脂質等雜質后，用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產品適用于魚類、蝦類、貝類動物全血，一次可從20 μl全血中提取到3-10 μg高純度基因組DNA（OD260/OD280 =1.7-1.9），此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續實驗。

質量控制

純化的基因組DNA質量通過限制性酶切和單拷基因的PCR擴增鑒定。

保存條件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余試劑置于室溫（15-25℃）干燥條件下保存1年。

如果消化緩沖液DS和MS中沉淀，可在55℃加熱溶解，待恢復室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。

操作步驟

預備實驗：

取血液/體液樣本在紅細胞計數板進行細胞計數，計算其細胞數量級10x/ml，（7-x）ml就是提取基因組DNA所需的血液體積數。

1   取血液/體液樣本（7-x）ml加入到一只1.5 ml離心管中，5,000 rpm離心3min，棄上清，收集沉淀。

● 如果樣本超過1.5ml，可分次加入，離心收集沉淀，務必使離心所得的沉淀中包含105-106的細胞數。

2   加入200靗消化緩沖液DS，旋渦振蕩直至完全分散。

● 如需去除RNA，加入消化緩沖液DS后，再加入4靗 RNase A（100 mg/ml）溶液，震蕩混勻，室溫放置5min。

3   加入20靗蛋白酶K和220靗裂解液MS，漩渦振蕩混勻。65℃溫浴10min。溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。

● 加入裂解液MS時可能會產生白色沉淀，一般65℃放置時會消失，不會影響后續實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底

● 可能導致提取DNA量少和提取出的DNA 純度降低。

4   加入220靗無水乙醇，上下來回顛倒混勻。此時可能出現絮狀沉淀，將溶液及絮狀沉全部淀轉移到純化柱中。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 此時基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

5   加入500靗去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、脂質等雜質洗脫，以獲得高質量基因組DNA。

6   加入500靗漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋，即含75%乙醇。

7   加入500靗漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

8   12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。

● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續的酶促反應（PCR或酶切）。同時利于基因組DNA充分溶解。

9   將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處，懸空滴加30-100靗純化液TE。室溫放置2min。

10   12,000 rpm離心2min，管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

● 純化液TE可用去離子水代替，但其pH需為8.0-8.5。體積視質粒拷貝數多少、用戶對質粒濃度要求而定。

● 對純化液TE 進行60℃預熱，會提高基因組DNA的產量。

注意事項：

  ● RNA樣本保存液如出現沉淀，37℃加熱振蕩混勻。

  ● 加入RNA樣本保存液后，樣本不能立即置于-20℃或-80℃，要先4℃置放過夜，待組織充分浸潤后再置于低溫保存。

  ● 樣品浸沒在RNA樣本保存液中，可在37℃保存1天，25℃保存1周，4℃保存1個月，-20℃長期保存；使用時請注意保存時限。

  ● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經特殊處理，離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA樣本保存液可以配合各種常見的RNA提取試劑盒使用，如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒，不影響試劑盒操作，不影響提取所得RNA質量及其后續實驗。