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產(chǎn)品介紹：             

產(chǎn)品說明

本產(chǎn)品用于多種動物組織（新鮮或凍存）與培養(yǎng)細胞等樣本的基因組DNA的純化。已成功提取魚類、蝦類、貝類、蟹類等海洋動物組織基因組DNA。其純化原理是利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA，由硅膠膜柱可逆吸附基因組DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產(chǎn)品可從不超過10 mg組織材料中提取到3-35 μg 超純基因組DNA（OD260/OD280 = 1.7-1.9），此基因組DNA可直接用于PCR、酶切、文庫構(gòu)建等后續(xù)實驗。

質(zhì)量控制

純化的基因組DNA質(zhì)量通過限制性酶切和單拷基因的PCR擴增鑒定。

保存條件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余試劑置于室溫（15-25℃）干燥條件下保存1年。

如果消化緩沖液DS和MS中沉淀，可在55℃加熱溶解，待恢復(fù)室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。

操作步驟

取少量樣本材料，放入液氮預(yù)冷的研缽中。快速用力研磨的同時加入少量液氮，直至樣本材料被研磨成粉末。將研磨好的樣本轉(zhuǎn)移至1.5 ml離心管中，每管組織材料含量應(yīng)不超過10 mg。

如果沒有液氮，盡快將組織切小置于離心管，進入下一步。

● 每支離心管中的樣本當(dāng)量不宜超過10 mg。每10 mg樣本材料可獲得10μg基因組DNA。樣本量過大，將會影響細胞核裂解效率并可能堵塞純化柱，進而降低基因組DNA的得率與純度。

2   加入200 μl消化緩沖液DS，漩渦振蕩15 s。

● 如需去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml），振蕩混勻，室溫放置5min。

3   加入20 μl蛋白酶K，漩渦振蕩混勻。簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。55℃溫浴至溶液變清亮（期間可適當(dāng)顛倒幾次，溫浴后簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠）。

4   加入220 μl裂解液MS充分顛倒混勻，65℃溫浴10 min，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

● 加入裂解液MS時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般65℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。

5   加入220 μl無水乙醇，上下顛倒混勻。此時可能出現(xiàn)絮狀沉淀。簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。將溶液及絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到純化柱中。12,000rpm離心1min，棄濾液。

● 此時基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

6   加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的蛋白、脂質(zhì)等雜質(zhì)，以獲得高質(zhì)量基因組DNA。

7   加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋，即含75%乙醇。

8   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

9   12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。

● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（PCR或酶切）。同時利于基因組DNA充分溶解。

10 將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處，懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。 12,000 rpm離心2min，管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

● 洗脫液TE可用去離子水代替，但其pH需為8.0-8.5。

● 對洗脫液TE 60℃預(yù)熱，會提高基因組DNA的產(chǎn)量。

注意事項：

  ● RNA樣本保存液如出現(xiàn)沉淀，37℃加熱振蕩混勻。

  ● 加入RNA樣本保存液后，樣本不能立即置于-20℃或-80℃，要先4℃置放過夜，待組織充分浸潤后再置于低溫保存。

  ● 樣品浸沒在RNA樣本保存液中，可在37℃保存1天，25℃保存1周，4℃保存1個月，-20℃長期保存；使用時請注意保存時限。

  ● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經(jīng)特殊處理，離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA樣本保存液可以配合各種常見的RNA提取試劑盒使用，如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒，不影響試劑盒操作，不影響提取所得RNA質(zhì)量及其后續(xù)實驗。